Рефераты по медицине
Фармакотехнологическое изучение липофильной фракции, полученной из цветков T. patula

Скачать реферат [336 Кб]   Информация о работе

Министерство здравоохранения

Российской Федерации

Пятигорская государственная фармацевтическая академия

Дипломная работа

Фармакотехнологическое изучение липофильной фракции, полученной из цветков T. patula

по специальности 040500 - фармация

Пятигорск, 2004 год

Введение

Актуальность темы.Общеизвестно, что фитопрепараты в современной медицине составляют более 1/3 от всех потребляемых лекарственных средств. Это определило рост потребности в растительном сырье для их производства как на российском так и на мировом рынках.

Поэтому актуальной задачей является поиск и мобилизация новых, раннее не используемых официальной медициной растений. В настоящее время многие исследователи уделяют большое внимание изучению дикорастущих видов, имеющих обширный ареал произрастания, с целью выявления возможности их использования для выделения биологически активных веществ. К тому же, на протяжении многих лет в центре внимания химиков и фармакологов находятся природные флавоноиды и каротиноиды, характеризующихся широким спектром биологического действия (так, для одних только флавоноидов известно около 50 (!) видов активности).

Бархатцы прямостоячие (Tagetes patula) - широко распространены на Северном Кавказе, в некоторых районах введены в культуру. Они характеризуются высоким содержанием каротиноидов, флавоноидов и других биологически активных веществ, но в настоящее время недостаточно изучены и не нашли свое применение в медицине.

Цель и задачи исследования:Целью данной работы является получение фракции, одновременно содержащей флавоноиды и каротиноиды, изучение ее фармакологической активности, качественного и количественного состава, а также разработка технологии и методов стандартизации лекарственного препарата на ее основе. Для осуществления поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- провести фитохимическое исследование сырья;

- определить основные морфолого-анатомические признаки цветков T. patula.

- разработать методику получения липофильной фракции;

- провести фармакологические испытания полученной фракции;

- провести качественный и количественный анализ содержания основных биологически активных веществ в сырье и липофильной фракции;

- разработать мазь на основе липофильной фракции и методы ее стандартизации.

Глава 1. Обзор литературы

1.1 Общая характеристика рода Tagetes

1.1.1 Фармакогностическая характеристика рода Tagetes и его таксономическое положение в семействе Asteraceaee

Бархатцы (Tagetes L.) - однолетние травянистые растения из семейства сложноцветных (Asteraceae).

Корзинки цилиндрические или чашеобразные, большей частью одиночные, редко собранные в соцветия. Обертка из одного ряда пяти сросшихся кожистых листочков, покрытых продолговатыми и линейными рассеивающими плоскими железками. Общее цветоложе плоское, голое. Цветки диска трубчатые обоеполые, золотисто–желтые, оранжевые или бурые; краевые цветки женские язычковые однорядные (у культурных, махровых форм расположенные во много рядов) золотисто–желтые, светло–и темно оранжевые или бурые. Лопасти столбика туповатые, у срединных цветков более длинные, закрученные, у краевых - язычковых – расходящиеся. Хохолки у неодинаковых и неравных пленочек, из которых одни сросшиеся тупые, другие большей частью свободные, заостренные в ость. Стебель прямой, большей частью ветвистый, листья супротивные или очередные, перисто–раздельные с просвечивающими редкими округлыми, бурыми железками [36].

Из 26 видов, распространенных в Америке от Аризоны до Аргентины, к нам занесены в культуру три: бархатцы отклоненные (T. patula), бархатцы прямостоячие (T. erecta), бархатцы мелкие (T. minuta) [36,50,51].

Бархатцы – растения с обильным цветением до глубокой осени.

Известно также таксономическое положение в семействе сложноцветных (Asteraceae): [36]

семейство: Asteraceae

подсемейство: Carduoideae

колено: Heleniaceae

род: Tagetes

1.1.2 Основные группы биологически активных веществ рода Tagetes

Таблица 1. Фенольные соединения [46,16]

Биологически активные вещества

Структура

Кверцетагетрин

Тагетиин

Патулетрин

Патулетин

Кверцетагетин

Кемпферитрин

Таблица 2. Терпеноиды [65,66]

Биологически активные вещества

Структура

Тагетон

Дигидротагетон

в - оцименон

Виолоксантин

в – каротин

Таблица 3. Полиацетиленовые соединения [77]

Биологически активные вещества

Структура

5-(3-бутен-1-инил)-2,2ґ-битиенил

5-(4-гидрокси-1-бутинил)-2,2ґ-битиенил

5ґ-метил-5-(3-бутен-1-инил)-2,2ґ-битиенил

1.1.3 Биологическая роль рода Tagetes и его применение в медицине

Цветки бархатцев в народной медицине применяют при рожистых воспалениях кожи, настой бархатцев используют в качестве диуретических, потогонных, антигельминтных средств. Флавоноид из T.patula. - патулетин – снижает проницаемость капилляров в большей степени чем кверцетол, обладает гипотензивным действием. Геленин (флавоноид из T.patula.) применяется как новый медикамент оказывающий специфическое действие на сетчатку глаз. Все флавоноиды из бархатцев обладают диуретическим действием и Р витаминной активностью. Известен нематоцидный эффект бархатцев и их фитонцидные свойства. Препараты, полученные из бархатцев распростертых оказывают противоязвенное, противовоспалительное и ранозаживляющее действие. Для некоторых препаратов из бархатцев выявлена противовирусная, антистафилакоковая и противогрибковая активность [51,48,52].

Биологической активностью обладает эфирное масло надземной части цветущего растения Tagetes (T.minuta или T.grandilifera.). В состав масла входят тагетон, дегидротагетон, в - оцименон, карбон, а также в - оцимен и его ацетат. В парфюмерии и косметике используется в ограниченных количествах. Известны сведения о полезных ароматерапевтических свойствах в качестве антидепресанта, для снятия нервных напряжений и расстройств [48,53].

1.2 Физико-химическая характеристика флавоноидов и методы их анализа

1.2.1 Общая характеристика флавоноидов

Флавоноиды – одна из самых многочисленных групп природных соединений. Их число составляет около 2000. В основном они являются производными бензо-g-пирона, в составе которого лежит фенилпропановый скелет, состоящий из С₆–С₃– С₆углеродных единиц:

фенилпропановый скелет

В зависимости от степени окисления и гидроксилирования скелета флавоноиды подразделяются на группы: флавоны, флавонолы, флаваноны, изофлавоны, антоцианидины, катехины, ауроны, халконы, ксантоны [9,37].

В растениях флавоноиды встречаются в свободном виде и в виде гликозидов.

В качестве сахаров в флавоноидных гликозидах встречаются: D – галактоза, D – ксилоза , D – манноза , L –арабиноза , L – рамноза. Из уроновых кислот обычно встречаются D – глюкуроновая кислота. В настоящее время все известные флавоноидные гликозиды делятся на три группы:

1) О – гликозиды, в которых сахар связан с агликоном полуацетальной связью через атом кислорода. О – гликозиды в зависимости от количества сахаров, положения и порядка присоединения делятся на монозиды, биозиды, дигликозиды.

2) С – гликозиды или гликофлавоноиды, которые подразделяются на С – гликозиды, С–О – дигликозиды, С - O –биозиды. В гликофлавоноидах углеродные заместители связаны с агликоном через атом в шестом или восьмом положениях.

3) Комплексные соединения – представляют собой ацилированные гликозиды. В зависимости от положения ацильного заместителя они делятся на гликозиды денсиноидного типа (агликоны которых обычно связаны с ароматическими кислотами, известны также и сложные эфиры с алифатическими кислотами) и гликозиды со сложноэфирной связью в сахарных заместителях [37].

Флавоноиды локализуются главным образом в цветках, листьях и плодах, реже в корнях и стеблях; содержание их в растениях колеблется от 0.5 до 30%.

В чистом виде флавоноиды представляют собой кристаллические соединения с определенной температурой плавления, желтые (флавоны, флавонолы, халконы и др.,), бесцветные (изофлавоны, катехины, флаваноны), а также окрашенные в красный или синий цвет (антоцианы) в зависимости от pН среды.

Агликоны флавоноидов растворяются в эфире, ацетоне, спиртах, практически нерастворимы в воде. Гликозиды флавоноидов, содержащие более трех остатков сахаров, растворяются в воде, но нерастворимы в эфире и хлороформе. Флавоноидные гликозиды обладают оптической активностью.

1.2.2 Методы выделения флавоноидов

Метод выделения зависит от характера растительного материала и типа флавоноида, который необходимо выделить. Выбор растворителя для экстракции зависит от полярности флавоноида. Более полярные растворители используют для экстракции гликозидов и антоцианов, а менее полярные для агликонов. Изофлавоны, флавоны, дигидрофлавоны, сильно метилированные флавоны и флавонолы экстрагируют бензолом, хлороформом, эфиром, этилацетатом. Гликозиды, сильно гидроксилированные флавоноиды, ауроны, халконы, легко переходят в спирты различной концентрации или ацетон [9].

После экстракции, спиртовое извлечение упаривают, к остатку добавляют горячую воду, охлаждают, удаляют неполярные соединения (жирное масло, эфирное масло) из водной фазы хлороформом или четыреххлористым углеродом. Затем флавоноиды из водной фазы извлекают последовательно этиловым спиртом (агликоны), этилацетатом (монозиды) и бутанолом (биозиды, триозиды). Для разделения компонентов каждой фракции используют колоночную хроматографию на силикагеле, полиамидном сорбенте или целлюлозе.

1.2.3 Методы идентификации флавоноидов

Для идентификации флавоноидов используют их физико-химические свойства; температуру плавления, удельное вращение (гликозидов), УФ-, ИК-, ПМР – спектры, сравнивая их со спектрами известных образцов [21].

УФ- спектр флавоноидов характеризуется наличием, как правило, двух максимумов поглощения. Поглощение максимумов и их интенсивность характерны для различных групп флавоноидов [37].

Реакции, специфичные для всех групп флавоноидов, отсутствуют. Наиболее часто используются следующие реакции:

1. Цианидиновая реакция или проба Chinoda

Флавоноиды, флавононы и флавоны при восстановлении магнием в присутствии хлористоводородной кислоты дают красное или оранжевое окрашивание, обусловленное образованием антоцианидинов:

цианидин хлорид

2. Борно-лимонная реакция. 5 – оксифлавоны и 5 – оксифлавонолы взаимодействуют с борной кислотой в присутствии лимонной, образуя ярко-желтое окрашивание с желто-зеленой флюоресценцией (образование батохромного комплекса):

3. Реакция с треххлористой сурьмой. 5 – оксифлавоны и 5 – флавонолы, взаимодействуя с треххлористой сурьмой, образуют комплексные соединения, окрашеные в желтый или красный цвет:

4. С раствором аммиака. Флавонолы, флаваноны и флавоны дают желтое окрашивание с раствором аммиака, при нагревании переходящее в оранжевое или красное: халконы и ауроны дают красное или пурпурное окрашивание без нагревания. Антоцианы в присутствии аммиака или карбоната натрия дают синее или фиолетовое окрашивание.

5. Флавоны, халконы, ауроны, содержащие свободные ортогидроксильные группировки в кольце В, при обработке спиртовых растворов средним уксуснокислым свинцом образуют осадки, окрашенные в ярко – желтый и красный цвета.

6. С целью обнаружения флавоноидов в растительном материале широко используется хроматография на бумаге и в тонком слое сорбента. Обнаружение компонентов на хроматограмме осуществляется просматриванием их в УФ – свете. При этом флавононы, флавонол–3–гликозиды, флаваноны, халконы обнаруживаются в виде коричневых пятен; флавонолы и их 7–гликозиды - в виде желтых пятен [9,37].

1.2.4 Количественное определение флавоноидов

Количественное определение в последние годы проводят различными физико-химическими методами, так как они имеют ряд преимуществ перед химическими методами (например, гравиметрией, титриметрией) – таких, как быстрота, точность, возможность выделения отдельных флавоноидов и определение их незначительных количеств. К этим методам относятся: фотоколориметрия, спектрофотометрия, денситометрия с использованием хроматограммы на бумаге и в тонком слое сорбента [37].

Фотоколориметрический метод основан на цветных реакциях флавоноидов с солями различных металлов (алюминия, циркония, титана, хрома), с лимонно – борным реактивом и на реакции восстановления цинком или магнием в кислой среде.

Особенно ценным считается хроматденситометрический метод, сущность которого заключается в выделении и разделении флавоноидов с непосредственной количественной денситометрической оценкой окрашенной зоны на хроматограмме.

ГФ XI издания для количественного определения рекомендует метод дифференциальной спектрофотометрии.

Сравнительно редко для количественного определения флавоноидов применяют полярографию и метод амперометрического титрования [37].

1.3 Физико-химическая характеристика терпеноидов и методы их анализа

1.3.1 Общая характеристика терпеноидов

Терпеноиды – это огромная группа природных соединений, чрезвычайно распространенных как в мире животных, так и в мире растений. Терпеноиды в растительном мире представлены в виде эфирных масел практически всех пахнущих растений, смолообразованием и смоловыделением растений под общим названием «живица» [66].

Таблица 4. Классификация терпеноидов

тип

число углеродных атомов

Пример

строение

название

гемитерпены

5

изопрен

монотерпены

10

гераниол

сексвитерпены

15

фарлезол

дитерпены

20

геранил-гераниол

сестертерпены

25

офноболин А

тритерпены

30

сквален

тетратерпены

40

фитоин

политерпены

от 7*10³до 3*10⁵

каучук

Гемитерпены в растениях содержатся в очень малых количествах и были найдены с помощью высокоэффективной масс-спекрофотометрии. В следовых же количествах и также во всех растениях присутствуют фосфорилированные гемитерпны-D²–изопентилпирофосфат и D³-изопентилпирофосфат, являющиеся ключевыми интермедиаторами в биосинтезе терпенов [66,62].

Монотерпены – достаточно летучие вещества, с сильным и оригинальным ароматом, что используется в производстве душистых веществ. В силу своей летучести, они постоянно испаряются растениями в процессе вегетации, а в лаборатории их выделяют из растительного сырья перегонкой с водяным паром. Монотерпены, содержащие спиртовые группы могут находиться в растениях в связанной форме - в виде гликозидов, что соответствует их удерживанию и пролонгированному использованию.

Различают ациклические (мирцен), моноциклические (лимонен, логанин, хризантемовая кислота) и бициклические (a - пинен, борнимен, камфен) терпены.

Сесквитерпены представляют собой самую обширную группу среди всех терпеноидов как по количеству соединений, обнаруженных в природе, так и по множеству структурных вариантов и разнообразию типов углеродного скелета. В наибольшем количестве и разнообразии сексвитерпены присутствуют в растениях из семейств Magnoliaceae, Rutaceae, Cornaceae и Asteraceaee. Сексвитерпены бывают ациклические (фарнезен, нероледол), моноциклические (b - бисобален, элемол), бициклические (ледол, пачулевый спирт). Полученные свойства сесквитерпенов достаточно разнообразны. Некоторые из них обладают приятным и устойчивым запахом, что позволяет использовать их в парфюмерии в качестве душистых компонентов и фиксаторов запаха. В качестве лекарственных препаратов наиболее перспективными являются сесквитерпеновые лактоны. Спектр их действия достаточно широк: они обладают бактерицидной, фунгицидной, антифидантной и антитрактантной активностью. Но особенно ярко выражена цитотоксическая активность [66,37].

Дитерпены представлены значительно в меньшей степени в растительном мире. Дитерпены также делятся на ациклические (фитол), моноциклические (цембрен), бициклические (лабдан) и трициклические (циатан). Биологическая активность дитерпенов ярко выражена: соединения этой группы терпеноидов очень часто проявляют цитотоксическую активность, причем столь эффективную, что ряд из них проходят клинические испытания; также противоопухолевое , антифидантное и антифунгицидное действие .

Сестерпеноиды - самая многочисленная группа терпеноидов, но и самая молодая. Основными источниками этой группы являются морские организмы (особенно губки). Яркими представителями этой группы являются: тетроловая кислота (антимикробная активность), маноамид (ингибитор фосфолипазы А₂, противовоспалительный эффект), спонгианолид А (ингибитор протеинкиназы С) и др.

Тритерпеноиды обычно накапливаются в растениях в виде эфиров различных кислот или в виде гликозидов. В последнем случае они образуют так называемые стероидные сапонины, а тритерпены, участвующие в этих образованиях, выделяют в группу сапогенинов. В растительном мире тритерпены представлены в свободной форме, т.е. не в качестве агликонов сапогениновых гликозидов. По структуре выделяют несколько типичных групп таких как:

- витостероиды (витеферин А)

- хинонметидные тритерпены (целастрол)

- лимоноиды (овакунон, трихимен Н)

Среди них обнаружены биологически активные субстанции различного типа: антифедантная, противовирусная, иммунно-регулирующая, цитотоксическая и т.д [66].

Тетратерпеноиды включают одну единственную, структурную группу – каротиноиды. Всего известно около 500 соединений этой группы, распространены они, в большей степени, в растительных организмах, где они и сентезируются. Основной структурной особенностью каротиноидов является наличие длинной сопряженной системы p - связи. Отсюда вытекают такие свойства каротиноидов как легкость окисления и восстановления, их способность поглощать фотоны малой и средней энергии (т.е. видимый и УФ – свет) и, соответственно, быть окрашенными соединениями. А из этих свойств уже вытекают и биологические функции каротиноидов: во – первых – это участие в процессе фотосинтеза, т.к. этот процесс включает стадии поглощения света и переноса электронов; во – вторых – это светозащитные свойства, связанные со способностью поглощать световую энергию (очевидно, излишнюю для растений), без существенных изменений структуры молекулы каротиноида.

1.3.2 Методы выделения терпеноидов

Терпеновые соединения, представляют собой большую группу органических веществ растительного происхождения, отличающиеся высокой и разнообразной активностью. Они находят широкое применение в медицине как в качестве индивидуальных лекарственных веществ (ментол, тимол, камфора), так и в составе сложных лекарственных препаратов.

Объектом анализа обычно служит выделяемая из растительного материала смесь моно – и сесквитерпеновых соединений – так называемое эфирное масло (ЭМ) [65,37].

Обычными методами выделения ЭМ из природных источников для последующего анализа является экстракция, перегонка с водяным паром, концентрирование на твердых сорбентах и в криоловушках. При этом ЭМ, выделенное из растительного материала различными способами, могут существенно отличаться по составу и соотношению основных компонентов.

Экстракцию терпеноидов из твердых и жидких образцов проводят органическими растворителями с низкими температурами кипения. Часто экстракцию осуществляют в течение определенного времени (иногда до нескольких суток) в аппарате Сосклета. Полученный экстракт концентрируют упариванием в токе инертного газа или с помощью вакуумной отгонки при низких температурах. К преимуществам этого метода можно отнести возможность выделения из образца термолабильных и малолетучих соединений, к недостаткам – необходимость концентрирования экстракта, что может привести к потерям мелколетучих веществ, возможность загрязнения испарителя и колонки газового хроматографа нелетучими соединениями и продуктами их разложения.

Для выделения ЭМ из растительного материала широко используются перегонка с водяным паром. Здесь используется стеклянные приборы различной конструкции, позволяющие с точностью ± 0,02 мл измерить объем выделенного ЭМ. Анализ на этой стадии заканчивается и на основании величины содержания ЭМ решается вопрос о качестве лекарственного растительного сырья. В процессе перегонки ЭМ собирается в 100 мл пентана или гексана и полученная смесь исследуется с помощью ГЖХ [65].

Разработан комбинированный метода выделения ЭМ с помощью сочетания перегонки с водяным паром и экстракция терпеновых соединений из дистиллята органическими растворителями. Для анализа требуется от 1 до 15 г растительного материала, ЭМ собирается в 1 мл растворителя.

Другим методом выделения и концентрирования терпеноидов является улавливание летучих веществ сорбентами (тенакс, полисорб). Этот метод удобен в тех случаях, когда необходимо исследовать легколетучие вещества в газовых образцах. Определенный объем газа, содержащего летучие вещества, пропускают через трубку с сорбентом или капилляр, охлажденный жидким азотом.

Быстрым методом выделения является испарение ЭМ из очень малых количеств растительного материала (3 – 5 мг), помещенных непосредственно в модифицированный испаритель газового хроматографа.

Общие выводы

1. Проведено фитохимическое изучение цветков бархатцев отклоненных и установлено наличие следующих классов соединений: флавоноидов, кумаринов, каротиноидов и стероидов.

2. Изучены основные морфолого-анатомические признаки сырья. Основными анатомическими признаками являются: большое количество хромопластов (каротиноидов), строение эпидермальных волосков и эфирномасличные вместилища схизолизигенного типа;

3. Проведен количественный анализ основных биологически активных веществ в сырье. Содержание флавоноидов составило 4,64%, каротиноидов – 80,8мг/%.

4.Определены товароведческие показатели сырья (общая зола 9,2%, зола, не растворимая в 10% хлористоводородной кислоте 1,83%, влажность 5,9%).

5.С помощью прибора Клевенджера выделено эфирное масло процентное содержание которого составило 1,4% в пересчете на абсолютно-сухое сырье.

6.Разработана методика получения липофильной фракции с помощью экстракции неполярным растворителем (хлороформ) и проведен ее качественный и количественный анализ. Доказано наличие в ней биологически активных веществ, таких как: стеринов, кумаринов, каротиноидов и метоксилированных флавоноидов.

7.С помощью физико-химических методов (ТСХ, БХ и УФ - спектроскопии) впервые было доказано, что липофильная фракция содержит метоксилированный флавоноид, который по литературным данным соответствует патулетину. Его количественное содержание в липофильной фракции составило 8,67%;

8.Разработаны и теоретически обоснованы состав и технология мази, содержащая липофильную фракцию.

9.Проведена стандартизация мази по содержанию каротиноидов, которых должно быть не менее 3,14мг/%.

10.Проведены фармакологические исследования липофильной фракции и мази, полученной на ее основе. В результате установлено, что липофильная фракция обладает гепатоэащитным действием, превышающем действие эссенциале, и противоожоговой активностью. Мазь, полученная на основе ЛФ, ускоряет процессы восстановления участков кожи, пораженных термическими и химическими агентами, и может быть рекомендована в качестве эффективного средства для лечения термических и химических ожогов.

Список литературы

1. Бандюкова В.А. Применение цветных реакций для обнаружения флавоноидов путем хроматографии на бумаге. – Раст. ресурсы, 1965. Т.1, вып. 4, С. 591-596.

2. Бандюкова В.А. Распространение флавоноидов в некоторых семействах высших растений. Сообщ. №2. сем. Asteraceaee. – Раст. ресурсы, 1968. Т.IV, №1. С. 138-193.

3. Бандюкова В.А., Шинкаренко А.Л. Тонкослойная хроматография флавоноидов. Химия природ. соедин., 1973, №1, С. 20-25.

5 Беликов В.Г., Пономарев Н.И., Коковкин-Щербак. Применение математического планирования и обработка результатов эксперимента в фармации. М.: Медицина, 1973, 232 с.

6 Беликов В.В., Швайбер М.С. Методы анализа флавоноидных соединений. Фармация, 1970, №1, С. 66-78.

7 Биохимия фенольных соединений/ Под общ. Ред. Дж. Харбона.- М.,Мир, 1968.-452 с.

8 Блажий А., Шутый Л. Фенольные соединения растительного происхождения. –М.: Мир, 1977. –240 с.

9 Георгиевский В.П., Казаринов Н.А., Каррыев М.О. Физико-химические методы анализа биологически активных веществ растительного происхождения. Ашхабад: Ылым, 1976.- 238 с.

10 Крестов Г.А. Основные понятия современной химии./ Крестов Г.А., Березин Б.Д. – 2-е изд. – Л., 1986. – С. 104.

11 Государственная фармакопея СССР, XI изд. М: Медицина, 1987.- Т.1.-336, 333, 337 с.

12 Государственная фармакопея СССР, XI изд. М: Медицина, 1989.- Т.2.-400с.

13 Грядунова Г.П. Мази. М.: 1973 – С.68.

14 Ермакова В.А., Самылина И.А., Бобкова Н.В., Перешивкина О.Н. Разработка методики определения подлинности измельченного сырья различных морфологических групп// Современные аспекты изучения лекарственных растений. Науч. тр.- Т. 34.-Москва, 1995.- С.135-142.

15 Запрометов М.Н. Основы биохимии фенольных соединений. М.: Высшая школа, 1974. –214с.

16 Кирхнер Ю. Тонкослойная хроматография: В 2-х Т. М.: Мир, 1981.-Т. 2.- 523 с.

17 Клышев Л.К., Бандюкова В.А., Алюкина Л.С. Флавоноиды растений. Алма-Ата, 1978.

18 Ковалев И.П., Гордиенко В.Г., Шелковый В.Д. Применение физических методов для установления строения флавоноидов. – В кн.: Тезисы Третьего Всесоюзного симпозиума по фенольным соединениям. Тбилиси, 1976, С. 90-91.

19 Ковалев И.П., Титов Е.В. Инфракрасные спектры поглощения некоторых групп природных соединений. Атлас спектров. – Харьков: Изд-во Харьк. гос. ун-та. 1966, 203 с.

20 Лабораторное руководство по хроматографическим и смежным методам/ Под общ. редакцией О. Микеша. – М.: Мир, 1982. – 783 с.

Скачать полную версию реферата [336 Кб]   Информация о работе