Рефераты по медицине
Активность трансаминазы сыворотки крови на этапах восстановления после экспериментального токсического гепатита

Скачать реферат [111 Кб]   Информация о работе

ВЫПУСКНАЯ КВАЛИФИКАЦИОННАЯ РАБОТА СПЕЦИАЛИСТА

(ДИПЛОМНАЯ РАБОТА)

на тему: Активность трансаминазы сыворотки крови на этапах восстановления после экспериментального токсического гепатита

Введение

Актуальность исследования. Для современного человека стало привычно жить в обстановке токсической напряженности, обусловленной экологическими и технологическими катастрофами, профессиональными вредностями, несчастными случаями в быту. Около 6 млн. наименований химических соединений, накопленных в окружающей среде, представляют потенциальную опасность для здоровья населения (Лужников, 1994).

Наибольшую часть из химических соединений, накопленных в окружающей среде, занимают хлорорганические вещества.

Четыреххлористый углерод относится к хлорпроизводным метана. Это бесцветная жидкость с ароматическим запахом. Он широко используется в промышленности как растворитель масел, жиров, каучука (Лужников, 1989), в производстве огнетушителей. Является «прямым» гепатотоксином и широко применяется в экспериментальной медицине. Клиническая картина отравления включает в себя симптомы повреждения печени и почек (Блюгер, 1984). Печень принимает большое участие в процессах, которые обеспечивают постоянство концентрации питательных веществ в крови (Рапопорт, 1966). Печень является «центральной лабораторией организма», где осуществляются почти все процессы метаболизма и синтез жизненно важных веществ.

В печени постоянно идут процессы образования, инактивации и обезвреживания продуктов метаболизма и бактериальных, токсических веществ, образующихся и поступающих в организм из внешней среды (Абдуллаев, Каримов, 1989).

Наиболее специфическим признаком заболевания печени является повышение активности аланинаминотрансферазы (АлАТ).

При помощи храмотографии выделяют два изофермента, в нормальной сыворотке обе изоформы АлАТ представлены в равных количествах. В печеночной ткани обнаруживается почти исключительно одна из изоформ, активность которой возрастает в сыворотке крови при заболевании печени (Вилкенсон, 1981).

Широкое распространение и высокая активность аминотрансфераз в органах и тканях человека, а также сравнительно низкие величины активности этих ферментов в крови послужили основанием для определения уровня ряда аминотрансфераз в сыворотке крови человека при органических и функциональных поражениях печени. (Березов, Коровкин, 1998).

Лечение больных с острыми и токсическими поражениями печени, несмотря на прогресс современной гепатологии все еще остается крайне сложным. Поэтому актуален поиск новых веществ обладающих гепатопротекторными свойствами (Колпаков и др., 2001).

При этом большое внимание уделяется естественным природным метаболитам, которые могут быть использованы как средства для профилактики и коррекции токсических поражений печени (Проскурякова, 1995).

Установлен выраженный фармакотерапевтический эффект фитоэкстрактов при экспериментальном гепатите, вызванном четыреххлористым углеродом (Акцупов, 1984).

В состав желчегонных гепатозащитных растительных препаратов входят фенольные соединения, часть которых представлена оксикоричными кислотами и их гидропроизводными, обладающими высокой антиоксидантной и мембраностабилизирующей активностью (Сальникова и др., 1989).

Среди природных гепатопротекторов особо выделяется портулак огородный.

Как лекарственное растение портулак огородный (Portulaca oleracea) широко использовался в народной медицине еще во времена Гиппократа (Махлюк, 1993).

Портулак огородный употребляется в народной медицине для лечения заболеваний печени (Лавренов, Лавренова, 1999), при гипотонии и сахарном диабете (Блинков, 1983).

Систематическое использование портулака огородного в пищу снижает содержание холестерина, уменьшает проявление симптомов атеросклероза. Лекарственным сырьем служат стебли и листья, также семена.

Наибольшую активность оказывает сок. Свежее растение и препараты из него обладают противовоспалительным, мочегонным, желчегонным, легким сахаропонижающим действиями.

Свежий сок портулака показан при воспалительных заболеваниях почек, печени и слизистой оболочки мочевого пузыря. Он является антитоксическим средством по отношению к ядам змей и насекомых (Зимин, 1992).

Цель и задачи исследования. Целью нашей работы явилось исследование активности аланинаминотрансферазы в сыворотке крови кроликов при однократном введении четыреххлористого углерода и процессе лечения с использованием традиционных и нетрадиционных методов детоксикации организма. Для этого были поставлены следующие задачи:

1. Определить активность АлАТ в сыворотке крови кроликов при однократном введении четыреххлористого углерода (2мл на I кг веса) и в течение 10 дней после отравления.

2. Определить активность АлАТ в сыворотке крови кроликов при однократном введении четыреххлористого углерода и традиционном лечении витаминами (B_t, В₂, В₆, В|₂, С, Е, РР) в течение 10 дней.

3. Определить активность АлАТ в сыворотке крови кроликов при однократном введении четыреххлористого углерода в сочетании с приемом внутрь сока портулака огородного.

4. Определить активность АлАТ в сыворотке крови кроликов при однократном введении четыреххлористого углерода и комбинированном лечении комплексом витаминов и соком портулака огородного.

Научная новизна работы.Установлено, что при совместном лечении витаминами и портулаком огородным, активность аланинаминотрансферазы восстанавливается на пятый день после токсического поражения.

Глава I. Обзор литературы

1.1 Биохимические механизмы токсического поражения организма четыреххлористым углеродом (CCL₄).

Четыреххлористый углерод (CCL₄) является «прямым» гепатотоксином и широко применяется в экспериментальной медицине в качестве классического гепатотоксического агента (Блюгер, 1984). Он относится к хлорпроизводным метана. Это бесцветная жидкость с ароматическим запахом, молекулярная масса 153,81, хорошо растворим в жирах (Лужников, 1989).

Четыреххлористый углерод попадает в организм случайно или в результате приема с суисцидальной целью (Шерлон, Дули, 1999), через поврежденную кожу и органы дыхания (Подымова, 1993). Отравление происходит при вдыхании паров CCL₄в плохо вентилируемых помещениях (Блюгер, 1989).

Уже в первый день возможны симптомы острого отравления (Подымова, 1993).

Выделяют три степени тяжести отравления четыреххлористым углеродом:

I. Легкая степень характеризуется практическим отсутствием клинических признаков токсического поражения печени. Нарушение её функции выявляется только лабораторным методом исследования, при которых установлено повышение содержания аланин- и аспартатаминотрансфераз , фруктозодифосфатальдолазы, фруктозомонофосфатальдолазы, лактатдегидрогеназы - ЛДГ (общей) и ЛДГ₅, при радиоизотопном исследовании - нарушение гемодинамики печени.

П. При токсическом поражении печени средней степени тяжести наблюдаются клинические признаки её нарушения (увеличение, болезненность при пальпации, печеночная колика, желтуха, явление геморрагического диатеза) в сочетании с более выраженными изменениями показателей лабораторного метода исследования: в частности, отмечалось повышение активности цитоплазматических ферментов, уменьшение содержания Р -липопротеидов, холестерина, гипопротеинемия, при радиоизотопном исследовании - нарушении гемодинамики печени и её поглотительной функции при всех видах интоксикации и снижение выделительной функции при остром отравлении дихлорэтаном и четыреххлористым углеродом.

III.Тяжелая степень поражения печени характеризуется развитием синдрома печеночной энцефалопатии, желтухой, увеличением печени; при лабораторных исследованиях отмечалось высокое содержание в сыворотке крови ЛДГ₄_₅и малатдегидрогеназы - МДГ₃, появление дополнительной фракции МДГ₄, повышение активности глутаматдегидрогеназы, угнетениеактивности псевдохолинэстеразы, снижение уровня Р - липопротеидов, холестерина, фосфолипидов, при радиоизотопном исследовании - одновременно с нарушением гемодинамики, выраженные изменения поглотительно-выделительной функции печени. (Лужников, Шиманко, 1980). Четыреххлористый углерод оказывает наркотическое действие на ЦНС, вызывает поражение паренхиматозных органов - печени, почек (Лужников, 1984; Подымова, 1993).

На 2 - 3-й сутки после отравления, как правило, развиваются клинические признаки токсической дистрофии печени. Часто развивается геморрагический синдром, проявляющийся кровоизлияниями под конъюнктиву, носовым и желудочно-кишечными кровотечениями.

Нарушения свертывающей системы крови проявляются в первые сутки повышением уровня фибриногена крови и фибринолитической активности.

У всех больных с отравлением четыреххлористым углеродом имеются нарушения функций почек различной степени, в 85% развивается острая почечная недостаточность (ОПН) с олигоурией и азотемией. (Лужников, 1994).

Метаболические превращения четыреххлористого углерода являются основой его гепатотоксического действия, которое происходит в мембранах эндоплазматического ретикулума печени при участии цитохрома Р - 450 (Лужников, 1994).

В прямой интоксикации существенную роль играет избыточное образование свободных радикалов, присутствие которых обычно обнаруживает в составе желчи. Повреждающее клетки действие свободных радикалов опосредуют такие факторы, как активация фосфолипазы А, накопление лизофосфатидов, активация регенерирующего поли-АДФ-рибополимеразу фермента окислительной модификации ДНК, понижением содержания NAD и АДФ (Feher, Vereckei, Lengyel, 1995).

Также свободные радикалы вызывают разрушение субклеточных структур, содержащих липиды и липопротеиды, вследствие образования перекисей липидов (Дубинина,2006).

О поражении клеточной мембраны можно судить по понижению электрофоретической подвижности печеночных клеток.

Инициирование перекисного окисления липидов (ПОЛ) биомембран является типовым патогенетическим механизмом при заболеваниях печени различной этиологии. При токсическом поражении печени хлорированными углеводородами, инициирование ПОЛ является одним из начальных механизмов нарушения проницаемости мембран гепатоцитов и их альтерации (Виноградова, Харлицкая, 1989).

Важную роль в возникновении обратимых ультраструктурных нарушений различных типов клеток при развитии в них патологических изменений связывают с образованием пор в мембранах под влиянием ПОЛ и аккумуляцией клетками ионов кальция (Бондарева, Немова, Кяйвяряйнен, 2006; Виноградова и др. 1989).

Образование пор в мембранах лизосом открывает доступ для выхода их ферментов в цитозоль после воздействия четыреххлористого углерода, и видимо, приводит к необратимым изменениям и гибели гепатоцитов (Вакулин, 1989).

Также под воздействием высоких доз четыреххлористого углерода происходит быстрая дезагрегация рибосом до мономеров (Подобед, Федорова, 1995), увеличение размеров митохондрий вследствие их набухания, дезорганизация и уменьшение количества митохондриальных крист, одновременно с изменениями митохондрий происходит увеличение числа первичных лизосом, локализованных в основном вокруг пластичного комплекса Гольджи. В большинстве гепатоцитов происходит редукция гранулярного эндоплазматического ретикулума (Проскурякова, 1995; Абдуллаев, Каримов, 1989).

Выраженность изменений эндоплазматического ретикулума и митохондрий в различных гепатацитах в пределах печеночной дольки при остром отравлении четыреххлористым углеродом зависит от степени метаболической активности микросомальных энзимов в каждом гепатоците. Степень активации определяется структурно-функциональными особенностями этих гепатоцитов в печени интактных животных. Изменения популяции митохондрий в каждом гепатоците в значительной степени обусловлены степенью повреждения эндоплазматического ретикулума. Различная повреждаемость гепатоцитов четыреххлористым углеродом предполагает возможность восстановления функций части поврежденных гепатоцитов за счет процессов внутриклеточной репаративной регенерации (Шкурупий, 1973).

Показано, что после воздействия четыреххлористого углерода масса гепатоцитов, а следовательно и печени, возрастает в основном за счет полиплоидизации клеток при их невысокой пролиферативной активности и снижения процентного содержания двуядерных гепатоцитов. Проскурякова считает, что такие изменения популяции гепатоцитов способствуют преждевременному старению органа, поскольку не происходит естественное восстановление исходного количества клеток (Проскурякова, 1995).

Известно, что при токсических и хронических повреждениях печени наблюдается угнетение синтеза белка. Белковая недостаточность и дефицит незаменимых аминокислот в свою очередь приводят к снижению иммунного статуса организма (Хныченко и др., 2000).

Нарушения углеводного обмена при поражении печени могут сопровождаться явлениями как гипо- так и гипергликемии.

Установлено значительное снижение уровня гликогена в печени. При этом большое значение имеет развивающаяся гипоксия с преобладанием анаэробного гликолиза в печеночной ткани, уменьшением синтеза АТФ и возникает дефицит НАД-Н₂и НАДФ-Н₂.

О нарушении углеводного обмена свидетельствуют также существенные изменения промежуточного обмена углеводов, прежде всего содержание молочной и пировиноградной кислот в крови.

При отравлении хлороформом и четыреххлористым углеродом поглощение кислорода печеночной тканью уменьшается.

Понижение тканевого дыхания на срезах печени и снижение дыхательного коэффициента было обнаружено Н.Х. Абдуллаевым (, 1968) при введении животным гелиотрина и четыреххлористого углерода. По мнению автора, эти изменения свидетельствуют о нарушении окислительных процессов в результате угнетения активности дыхательных ферментов и накопления недоокисленных продуктов обмена в тканях печени.

Нарушения дыхания и окислительного фосфорилирования при введении гепатотоксических веществ, происходят на уровне дыхательной цепи. Так, В.М. Мишин (1972) через 24 ч. после отравления крыс четыреххлористым углеродом отметил полное разобщение дыхания и окислительного фосфорилирования митохондрий в результате потери на участке дыхательной цепи одного из переносчиков электронов - цитохрома с (Абдуллаев, Каримов, 1989).

При хронических воздействиях малыми дозами четыреххлористого углерода гистологические изменения в печени выражаются в появлении мутного набухания, мелко - и крупнокапельного ожирения.

На начальном этапе, в течение суток после отравления животных большими дозами четыреххлористого углерода (от 0,6 мл на 100 г), выявляются в основном циркуляторные расстройства в виде расширения синусоидов и портальных капилляров с одновременным набуханием эндотелия и расширения пространств Диссе.

Таким образом, для отравления большими дозами гепатотоксических агентов характерны выраженные нарушения белкового, углеводного и фосфолипидного обмена, снижение содержание витамина С и повышение гидроксипролина, а также изменение системы «гистамин-гистаминаза» (Абдуллаев, Каримов, 1989).

Для диагностики поражений печени важное значение приобретают исследования топографии ферментов не только в органах, но и в клетках, где они локализованы раздельно и связаны с определенными клеточными структурами (Лужников, Костомарова, 1989).

1.2 Значение антиоксидантных свойств витаминов при лечении токсических поражений организма

Пероксидазный эффект гепатотропных ядов в значительной степени определяет патогенез их повреждающего действия на печень, поэтому в качестве гепатопропекторов широко применяют антиоксиданты (Венгеровский, Саратиков, 1988).

Ведущим звеном в гепатозащитном действии изучаемых антиоксидантов является их свойство ингибировать перекисное окисление липидов (ПОЛ). Подавляя этот процесс, они тормозят образование свободных радикалов и продуктов перекисного окисления липидов в гепатоцитах и связанное с этим нарушение проницаемости клеточных мембран. Кроме того, они предупреждают солюбилизацию мембранных ферментов и инактивацию ферментов, обеспечивающих высокий уровень обмена веществ, энергии и функционального состояния печени (Скакун, Ковальчук, 1987).

К антиоксидантам относятся витамины, флавоноиды, тиолы и др. (Венгеровский, Саратиков, 1988). Для восстановления функций печени после токсических поражений используют витамины: В,, В₂, В₆, В₁₂, С, Е, РР.

Одной из распространенных гипотез о биологической роли витамина Е является представление об антиоксидантном механизме его действия (Куница, Кузьменко, 1993).

Витамин Е (а - токоферол) тормозит накопление диеновых конъюгантов и малонового диальдегида, сохраняет ненасыщенные связи жирных кислот, повышает содержание восстановленного глутатиона и отношение SH / SS-групп в мембранах печени при экспериментальной патологии, вызванной четыреххлористым углеродом (Венгеровский, Саратиков, 1988).

Витамин Е предохраняет окисление биологических систем перекисями жиров. Предохранение окисления полиненасыщенных жирных кислот витамином Е или антиоксидантами происходит путем прерывания радикальной цепной реакции. (Букин, 1982).

Существует прямая связь между витамином Е и тканевым дыханием и, обратная связь, между этим витамином и степенью окисления липидов. Токоферолы разрушают реактивные формы кислорода (Березов, Коровкин, 1998).

Роль витамина Е как ингибитора свободно-радикального окисления велика в процессе перекисного окисления липида скелетных мышц (Надиров, 1981).

Тиамин и его производные широко применяются в клинике при лечении сердечно-сосудистой и эндокринной систем, различных по этиологии поражений печени, инфекционных заболеваний. В развитии многих из указанных патологических процессов существенную роль играют иммунологические механизмы. Проведенные эксперименты показали, что введение тиамина из расчета 100 мкг на 100г веса тела, стимулирует формирование иммунного ответа у здоровых и отравленных четыреххлористым углеродом крыс, причем стимулирующий эффект тиамина у отравленных животных был выражен сильнее, чем у здоровых (Прокопенко, Конопля, 1978).

Витамин В, в форме тиаминпирофосфата является составной частью минимум 5 ферментов, участвующих в промежуточном обмене веществ. Тиаминпирофосфат входит в состав двух сложных ферментных систем -пируват - и а - кетоглутаратдегидрогеназных комплексов, катализирующих окислительное декарбоксилирование пировиноградной и а-кетоглутаровой кислот. В составе транскетолазы тиаминпирофосфат участвует в переносе гликоальдегидного радикала от кетосахаров на альдосахара (Березов, Коровкин, 1998).

Пиридоксальфосфат - коферментная форма витамина В₆, является представителем новой группы высокоэффективных лекарственных средств -препаратов метаболической терапии. Его успешно применяют у больных хроническим гепатитом и циррозом печени. Введение пиридоксальфосфата при токсическом гепатите, вызванном введением четыреххлористого углерода, приводит к ассоциации молекул АсАТ в крови с образованием менее активных ассоциатов (Ковлер, Павленко и др., 1986).

Пиридоксальфосфат является простетической группой аминотрансфераз, катализирующих обратимый перенос аминогруппы от аминокислот на а - кетокислоту и декарбоксилаз аминокислот, осуществляющих необратимое отщепление углекислого газа (С0₂) от карбоксильной группы аминокислот с образованием биогенных аминов (Березов, Коровкин, 1998).

При лечении токсических поражений печени рибофлавином (витамин В₂) полностью восстанавливается электролитный состав фракции крови, содержание электролитов в печени остается сниженным (Якушева, 1991).

Коррекция содержания электролитов в стенке кровеносных сосудов при лечении токсического гепатита рибофлавином связана с антиоксидантными свойствами препарата, что приводит к нормализации мембранного транспорта и трофического обеспечения органа, ускорению процессов регенерации, улучшению морфологической картины, функционального состояния печени, кровообращения в органе и в организме в целом (Якушева, 1986).

Основные биохимические функции кобаламина (витамин В,₂)

заключается в изомеризации L-глютаминовой кислоты в L-трио-р¹-метиласпарагиновую, метилмалонилкофермента А, превращения глицерина в (3-оксипралиновый альдегид, лизина в маслянную или уксусную кислот. (Овчинников, 1987).

При недостаточности витамина В₁₂наблюдается пернициозная анемия, болезнь Бирмера-Аддисона, характеризуется тяжелым нарушением кровотворения, недостаточной секреции желудочного сока и поражениями НС.

Мукопротеиды, содержащиеся в желудочном соке, обладают способностью связывать коболамин и способствовать его всасыванию через слизистую оболочку кишечника. Лишь небольшая часть витамина может усваиваться в свободном виде путем простой диффузии. В плазме коболамин связывается с белками (Рапопорт, 1966).

Витамин С участвует в окислительно-восстановительных процессах, в реакциях гидроксилирования коллагена, синтезе гормонов коры надпочечников (кортикостероидов), аминокислот триптофана и др. (Березов, Коровкин, 1988).

Витамин С занимает прочное место в арсенале средств, принимаемых при заболеваниях печени. Он активируя окислительные процессы, оказывает положительное влияние на синтетические и другие реакции в углеводном, белковом, жировом, а самое главное - энергетическом обмене. Это положительно отражается на морфофункциональных особенностях тканей, органов, в том числе и на печени (Абдуллаев, Каримов, 1989).

Витамин РР (никотиновая кислота) входит в состав НАД или НАДФ, являющихся коферментом большого числа обратимо действующих в окислительно-восстановительных реакциях дегидрогеназ.

Ряд дегидрогеназ используют только НАД и НАДФ (малатдегидрогеназа и глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа) другие могут катализировать окислительно-восстановительные реакции в присутствии любого из них (Березов, Коровкин, 1998).

Витамин РР обладает специфическим сосудорасширяющим действием (Рапопорт, 1966), широко распространен в растительных продуктах может образовываться из триптофана- из 60 молекул триптофана может образоваться одна молекула никотинамида (Северин,2003)

Скачать полную версию реферата [111 Кб]   Информация о работе